Alexa Fluor532 荧光染料(AF532)标记试剂盒说明书
产品名称
Alexa Fluor532荧光染料(AF532)快速标记试剂盒
产品货号
ZXLAF-3005A
包装规格
4次标记/盒(0.1mg蛋白/次标记)
预期用途
用于含氨基(NH2-)的抗体、蛋白、细胞、核酸、激素、抗生素、生物碱等分子的Alexa Fluor532荧光染料(AF532)快速标记。适用于化学发光、流式细胞术、Elisa、免疫印迹(WB)、免疫荧光染色、免疫组化、细胞学、单分子、蛋白纯化等免疫检测系统。
标记原理
本试剂盒采用高活性的AF532荧光染料活化物质,结合简约高效的滤过装置实现对各类物质的AF532荧光染料快速标记。试剂盒中已处于高活化态的有效成分,能与待标记分子上的氨基(NH2-)特异性结合,形成稳定的偶联物。过量游离的活化成分可通过试剂盒中的配套的滤过装置去除,以达到纯化和终止偶联的目的。偶联物收集后可直接使用或根据需要进行凝胶过滤提纯后使用。
主要组成成分
(1) R1试剂:AF532荧光染料 4支
(2) R2试剂:AF532荧光染料溶剂 2mL×4支
(3) B1试剂:置换液 1.5mL×1支
(4) B2试剂:清洗液 5mL×1瓶
(5) M1设备:滤过浓缩管 4支
下列试剂或仪器标记操作时需要,但不包含在本试剂盒中:
(1) 移液器:10μL、200μL、1mL
(2) 37±1℃水浴锅或培养箱
(3) 震荡仪
(4) 离心机
储存条件及有效期
(1) 储存有效期:2~8℃条件下,有效期为12个月;
(2) 试剂盒开封后,未溶解使用的R1试剂≤-20℃保存;
(3) 生产日期和使用期限:详见产品外包装标签。
标记方法和步骤
(1) 实验前准备
1) 请仔细阅读本说明书,本试剂盒可进行4次标记实验,每次标记实验的最佳标记量为0.1mg,可接受标记量为0.05-0.2mg。
2) 将处于冷冻或冷藏状态的待标记物提前恢复室温。
3) 将R1试剂进行瞬时离心以确保固体物处于管底。
4) 请打开水浴锅或培养箱,并设置工作温度为37±1℃。
(2) 标准操作方法
1) 取1支滤过浓缩管垂直放在离心管架上,使用移液器分别加入200 μL置换液和0.1mg待标记蛋白,轻轻吹打混匀,TIP头不要触碰到液体底部的滤膜;
注意:①如果0.1mg的待标记蛋白体积>300μL时,先使用上述滤过浓缩管浓缩至<300μL后,再加200 μL置换液;
2) 8000 g离心5min(滤膜上若仍有残留液体可适当延长离心时间以除尽),弃废液;使用移液器加入100 μL置换液,轻轻吹打混匀,垂直放在离心管架上备用;
3) 取1支AF532荧光染料(R1试剂)垂直放在离心管架上,加入2mL AF532荧光染料溶剂,震荡混匀后立即取5μL加入步骤2)中备用的滤过浓缩管内,轻轻吹打混匀;
4) 用封口膜将滤过浓缩管密封并置37℃±1℃孵育20min;
5) 滤过浓缩管内加入300 μL清洗液,轻轻吹打混匀,8000 g离心5min,弃废液;重复步骤3次;
6) 滤过浓缩管内加入200 μL清洗液,使用移液器连续轻轻吹打20次以充分回收标记物。将滤过浓缩管内溶液全部转移至冻存管内。此回收溶液即为标记了AF532荧光染料的蛋白溶液,可根据需要进行下一步实验应用或保存。
常见问题解释
(1) 哪些蛋白或分子可以使用本试剂盒进行AF532荧光染料标记?
条件①:待标记蛋白分子量需要>30 kD;
条件②:待标记蛋白需要含氨基(NH2-)结构。
满足以上两个条件的蛋白均能使用本试剂盒标记。若待标记物不满足以上条件,请选择本公司其他规格的标记试剂盒。
(2) 本试剂盒可标记多少mg蛋白?
本试剂盒可进行4次标记实验,每次标记实验的最佳标记量为0.1mg。即可以做4次标记实验,一共可标记0.4mg蛋白。如果需要标记的蛋白量更大,请选择本公司其他规格的标记试剂盒。
(3) 本试剂盒标记后的蛋白储存条件?
短期(≤30天)保存在2-8℃,长期保存≤-20℃(等比例添加甘油)
如有需要,请选择本公司AF532荧光染料标记蛋白保存液。
(4) 本试剂盒标记后的蛋白稳定性如何?
偶联物的稳定性很大程度上取决于蛋白质本身。使用本试剂盒标记
的AF532荧光染料化单克隆抗体,经免疫检测平台验证,具有较
好的热稳定性和实时稳定性。如需要提升标记产物的稳定性,可实
验室自行筛选含稳定成分的缓冲液,也可选择本公司配套的AF532
荧光染料标记产物稳定缓冲液。
(5) 如有其他问题请联系技术支持。
注意事项
(1) 使用前请仔细阅读本说明书。若有疑问请先与技术支持确认,再开始标记实验!
(2) 请在通风良好的实验室内使用本试剂盒。
(3) 本试剂盒AF532荧光染料溶剂(R2试剂)含DMSO成分,标记实验产生的废液请及时密封、处理。
(4) 本试剂盒仅限于科学研究领域的专业人员使用。
(5) 本试剂盒仅供实验室研究使用,不得用于临床诊断或临床治疗,不得用于食品或药品,不得储存在普通民房住宅内。
(6) 使用本试剂盒时,请穿实验服并佩戴口罩和一次性手套。
基本信息
无锡子晓生物科技有限公司
Wuxi ZIJOY Biotechnology Co., Ltd
地址:无锡市惠山区智慧路1号4号楼
技术支持:2076028640@qq.com
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*本试剂盒仅供实验室研究使用!